凋亡試劑盒（綠色熒光）

凋亡試劑盒（綠色熒光）

說明

一般描述

廣泛使用的方法用于確定凋亡，包括基于瓊脂糖凝膠電泳的基因組DNA分析以及基于3H-胸苷或5-溴-2′-脫氧-尿苷的DNA片段檢測。該方法包含在特定的細胞群中將片段化的低分子量DNA與未片段化的高分子量DNA進行分離。因此，這些方法并不提供關(guān)于在特定細胞群或特別是組織切片中某個獨立細胞命運的信息?；蛘?，獨立的凋亡細胞可能因其特征性的核染色質(zhì)堆疊和片段而可通過顯微鏡進行識別，但這種方法具有主觀性并受限于形態(tài)發(fā)生最大變化這一相對窄的時間窗口。

凋亡的標(biāo)志是DNA的降解，而這在早期是對核小體間DNA連接體區(qū)域是有選擇性的。DNA的切割可能會產(chǎn)生雙鏈和單鏈的DNA斷裂（切口）。兩種類型的斷裂都可在酶促反應(yīng)中利用修飾的核苷酸（如生/物/素-dUTP、DIG-dUTP、熒光素-dUTP）的游離3′-OH端標(biāo)記而被檢測到。這些酶末端轉(zhuǎn)脫氧核苷酰酶（TdT）可催化脫氧核糖核苷酸的模板非依賴性聚合至單鏈及雙鏈DNA的 3′-末端。這種方法也被稱之為TUNEL(TdT-介導(dǎo)的 dUTP-X 缺口 末端標(biāo)記)。或者，游離的3′-OH基團可能通過一種稱為切口翻譯的模板依賴機制而利用DNA聚合酶被標(biāo)記。然而，TUNEL法被視為更為敏感且快速的。

試劑盒用于在單細胞水平對凋亡進行檢測和定量，基于對DNA鏈斷裂的標(biāo)記（TUNEL技術(shù)）；通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行分析。

特異性

TUNEL反應(yīng)傾向于對在凋亡過程中產(chǎn)生的DNA鏈斷裂進行標(biāo)記。這能夠?qū)⒌蛲雠c壞死以及由細胞增殖抑制藥物或放射誘導(dǎo)的主要DNA鏈斷裂進行區(qū)分。

應(yīng)用

該原位細胞死亡檢測試劑盒，熒光素法是一種精準(zhǔn)、快速并簡便的非放射性技術(shù)用于在細胞和組織中利用流式細胞儀通過熒光顯微鏡和定量檢測在單細胞水平對凋亡的細胞死亡進行檢測和定量。[1][2]因此，該原位細胞死亡檢測試劑盒可用于多種不同的檢測系統(tǒng)。

舉例包括：

在基礎(chǔ)研究中對冷凍及福爾馬林固定組織切片中獨立的凋亡細胞進行檢測[3][4][5]

在癌癥研究中對惡性細胞對藥物誘導(dǎo)凋亡的敏感性進行測定[6]

通過雙染過程對異質(zhì)性細胞群中正在經(jīng)歷細胞死亡的細胞進行分析[7]

特點和優(yōu)勢

靈敏：使用熒光素-dUTP進行的直接標(biāo)記過程可降低背景標(biāo)記

快速：熒光素-dUTP的使用使得能夠在TUNEL反應(yīng)后直接對樣本進行分析

便捷：無需二級檢測系統(tǒng)

準(zhǔn)確：在分子水平（DNA鏈斷裂）進行凋亡識別并對處在凋亡極早期的細胞進行識別

包裝

1個試劑盒包含2種組分。

制備說明

工作溶液：將全部體積（50 μl）的酶溶液加入至剩下的450 μl標(biāo)記溶液以獲得500 μl TUNEL反應(yīng)混合物。

充分混合以平衡組分。